如何優(yōu)化水溶性維生素在普通C18柱上不保留的問(wèn)題

1990 年，Alpert **提出了親水性相互作用液相色譜(HILIC)法。此方法提供了一種在極性固定相上有效地分離小極性化合物的替代方法。小極性化合物在反相條件下不能很好地保留³。在親水性相互作用液相色譜柱中，水是*強(qiáng)的溶劑；由于流動(dòng)相通常含有少量的水，因此，這種方法非常適用于質(zhì)譜檢測(cè)法。

本文簡(jiǎn)要介紹了使用 Quasar SPP HILIC 色譜柱的親水性相互作用液相色譜模式有效分離維生素 B2和維生素 B3（圖 1）。

圖1.維生素 B2 和維生素 B3 的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

所有高效液相色譜法的參數(shù)如表1 所示。

表1.高效液相色譜法的參數(shù)。

所有溶劑均為高效液相色譜級(jí)的溶劑，并且所有樣品都采用0.45μm 尼龍過(guò)濾器（零件號(hào)：02542880）進(jìn)行過(guò)濾。

所有極性色譜表面都可以用于親水性相互作用液相色譜分離。典型的親水性相互作用液相色譜柱的固定相由常規(guī)的裸二氧化硅或經(jīng)極性官能團(tuán)改性的二氧化硅組成。親水性相互作用液相色譜法是正相(NP)、反相(RP)和離子色譜技術(shù)的混合體（圖 2）。反相洗脫液與正相的固定相和離子色譜法的帶電分析物相結(jié)合，產(chǎn)生了親水性相互作用液相色譜法的基礎(chǔ)。諸多文獻(xiàn)都已經(jīng)討論過(guò)此方法的分離機(jī)制，但是人們普遍認(rèn)為：極性固定相（而非缺水的流動(dòng)相）上會(huì)形成一層富含水的表層，從而產(chǎn)生液體/液體隔離。然而，這種分離機(jī)制比單獨(dú)的隔離更復(fù)雜，使用偶極-偶極相互作用和靜電相互作用可以加強(qiáng)保留。

圖2.親水性相互作用液相色譜法是一種混合技術(shù)。

極性較大的化合物與固定相液體層之間的相互作用更強(qiáng)， 因此，其保留時(shí)間比極性較小的化合物要長(zhǎng)。洗脫順序與反相高效液相色譜中觀察到的順序相反。

維生素 B2 和維生素 B3 含有幾種極性官能團(tuán)，這些極性官能團(tuán)可以處于帶電狀態(tài)，并利用烷基鏈鍵合相和傳統(tǒng)的反相分離，使保留變?nèi)?。因此，它們非常適合使用親水性相互作用液相色譜法進(jìn)行分離。如圖3 所示，在親水性相互作用液相色譜法模式下，這些極性化合物能夠輕松保留，而維生素 B2 在維生素 B3 之后洗脫，因此， 它的極性更強(qiáng)。

圖3.(i)維生素 B2 和(ii)維生素 B3 的高效液相色譜分析圖。

與傳統(tǒng)的多孔二氧化硅色譜柱相比，采用表面多孔顆粒相的實(shí)心核和多孔二氧化硅外涂層可以將成本降低50%，并將效率提高50%。

      ——文章轉(zhuǎn)自珀金埃爾默微信公眾號(hào)