有關(guān)如何延長(zhǎng)高效液相色譜 (HPLC) 色譜柱壽命的提示。
雖然高效液相色譜 (HPLC) 色譜柱的相對(duì)成本已經(jīng)隨著時(shí)間的推移而降低，但延長(zhǎng)色譜柱壽命仍然是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的重要考慮因素。以下提示有助于保護(hù)您的色譜柱并顯著延長(zhǎng)大多數(shù)固定相的使用壽命。
需要閱讀制造商有關(guān)色譜柱推薦壓力、洗脫液 pH 值和溫度操作范圍的文獻(xiàn)，并遵守這些范圍
請(qǐng)注意，較高的操作溫度通常與降低的pH操作范圍密切相關(guān)。在低pH值下，色譜柱降解的主要癥狀通常是柱效損失（峰展寬），而在高pH值下，峰拖尾和柱背壓增加。
每次啟動(dòng)洗脫液時(shí)，避免柱床的機(jī)械沖擊（掉落柱）并緩慢增加壓力和流速（1mL/min/min 是理想的）
大多數(shù)現(xiàn)代HPLC設(shè)備都能夠通過二級(jí)儀器設(shè)置自動(dòng)實(shí)現(xiàn)這種流量-壓力斜坡。由于壓力沖擊導(dǎo)致的床空洞通常通過分裂或非常嚴(yán)重的拖尾峰表現(xiàn)出來。如果替代品不易獲得，可以將色譜柱倒轉(zhuǎn)進(jìn)行分析；然而，色譜柱的效率可能會(huì)下降得更快，因?yàn)榇瞶ui終會(huì)向相反的方向坍塌，導(dǎo)致相同的色譜癥狀。
如果色譜柱變干，請(qǐng)使用至少含有 50% 乙腈的洗脫液非常緩慢地啟動(dòng)流速 (0.1mL/min/min)
如果懷疑“標(biāo)準(zhǔn)”（非“水溶液”或非極性嵌入相類型）反相色譜柱因使用
100 %水性流動(dòng)相而出現(xiàn)相崩潰（縮短保留時(shí)間、效率低下），則應(yīng)在高流速下重新激活色譜柱60 °C下的100 %
乙腈（注意不要從柱內(nèi)剩余的洗脫液中沉淀任何固體緩沖液）。在這兩種情況下，可能需要50到1 00個(gè)柱體積才能正確重新平衡或重新激活相。
每次使用后應(yīng)正確清洗色譜柱
推薦的洗滌程序可能是：
1、當(dāng)前含量為90%乙腈，每2個(gè)柱體積為10%有機(jī)物，并保持10個(gè)柱體積（再次注意通過緩慢增加乙腈濃度來避免固體緩沖液沉淀，如此處推薦的那樣）。
2、每2個(gè)柱體積加入10%乙腈到50:50的乙腈-水并保持10個(gè)柱體積。
3、從系統(tǒng)中取出端蓋并存放。色譜柱的封端對(duì)于避免相變干非常重要。
人們可能會(huì)使用較舊的 HPLC 系統(tǒng)作為色譜柱“清洗站”，這可以在“實(shí)時(shí)”儀器上節(jié)省大量操作時(shí)間。
如果樣品可能含有顆粒物，請(qǐng)選擇具有適當(dāng)篩孔尺寸的優(yōu) 質(zhì)在線過濾器；傳統(tǒng)色譜柱為 0.45 μm，U HPLC色譜柱為0.2μm是典型值
如果樣品基質(zhì)或稀釋劑可能會(huì)損害吸附劑（例如，由于pH值）或者化學(xué)性質(zhì)特別臟或難以處理，則可以使用保護(hù)柱，并且該相應(yīng)與分析柱的相匹配。在選擇保護(hù)柱的尺寸和連接到分析柱時(shí)要格外小心，以確保分離效率不會(huì)受到影響。
如果由于峰分裂或效率損失而懷疑色譜柱或篩板污染，可以反轉(zhuǎn)色譜柱的方向以進(jìn)行反沖洗，并且上述色譜柱洗滌程序是實(shí)現(xiàn)此目的的一個(gè)很好的“配方”
應(yīng)將色譜柱從檢測(cè)器上拆下以避免結(jié)垢，并注意反向沖洗只能作為zui終的手段，并且可能無法達(dá)到色譜柱的原始效率。
請(qǐng)記住，柱體積可以使用估算π × r2 × L × 0.6（用于 HPLC 柱填充材料的硅?的近似間隙孔隙率）
因此，對(duì)于150×4.6mm色譜柱，這將近似為：
3.142×(2.3)2×150×0.6=1496μL或1.5mL
